激光掃描共焦顯微鏡在生命科學研究領域用于對眾多活體和固定標本進行分子和細胞解剖學、生理學和生化研究。激光掃描顯微鏡固有的光學切片功能使其能夠根據在不同深度獲得的一系列圖像實現3D結構的準確高分辨率和高對比度重建。
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點掃描激光共焦顯微鏡是如何工作的?
共焦顯微鏡具有優于常規寬視場光學顯微鏡的幾個優點,包括控制景深的能力、消除或減少焦平面的背景信息(高信噪比)的能力以及從厚標本收集連續光學切片的能力。共焦方法的基本關鍵是使用空間濾波技術來消除標本中當前視場之外的散焦光或眩光。
點掃描激光共焦顯微鏡通過在整個視場中逐點掃描聚焦激光光斑來創建標本的光學切片。顯微鏡的物鏡將此光線聚焦在樣品上。從位于焦點處的樣品中的熒光團發射的光子由物鏡收集,并通過掃描單元傳送回來,穿過與物鏡焦平面共軛的針孔,使得只有焦點處的光子才會被光電倍增管檢測到。通過對激光位置的每個點處的光子進行成像,可以逐像素地重建圖像。
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什么是多光子激光掃描顯微鏡?
多光子顯微鏡是一款針對厚樣本進行深層成像的利器,特別是在活體實驗中。強聚焦近紅外激光脈沖穿透生物組織的深度優于可見光,這是由于近紅外光的吸收和散射較少。為進行成像,脈沖激光掃描整個標本,通常使用700至1300 nm的激發波長。多光子激發固有的會定位在焦平面處,因此降低了光毒性。更重要的是,光學切片不需要共焦針孔,因此可以收集更多的光信號,包括散射的熒光光子。結果是可以從厚標本深處獲得明亮、詳細的3D圖像。
如何才能使用奧林巴斯的激光掃描顯微鏡提高圖像分辨率?
總的來說,與傳統的寬視野顯微鏡技術相比,共焦顯微鏡的分辨率顯著提升。由于激光掃描顯微鏡的分辨率取決于物鏡的數值孔徑(NA),因此使用高NA物鏡來實現高分辨率圖像至關重要。奧林巴斯提供一套高NA物鏡,包括我們的X Line物鏡,這些物鏡具有高數值孔徑(NA)、圖像平坦度和色彩校正功能,可在更大的視場內提高圖像分辨率。對于深層組織成像,我們的A Line硅油浸沒物鏡的折射率與活細胞接近,可實現更明亮、更高分辨率的3D成像,并且球面像差很小。
為了在使用FVMPE-RS多光子系統進行深層成像時提高分辨率,TruResolution物鏡采用了自動校正環,可動態補償球面像差,同時保持準確的焦點位置。它們會在立體圖像的每個平面上自動調整,從而提供更清晰、更明亮的深層3D圖像。
為了在圖像處理過程中消除圖像模糊,以獲得更清晰、更銳利的高分辨率圖像,奧林巴斯為激光共焦和奧林巴斯超分辨率(OSR)圖像開發了專門的TruSight 2D和3D反卷積算法。
奧林巴斯激光掃描顯微鏡的光學分辨率是多少?
對于需要更高分辨率的研究,如共定位分析,用于FV 3000系統的奧林巴斯超分辨率(OSR)成像模塊可以循序或同時以接近典型共焦顯微鏡分辨率兩倍的約120 nm橫向(X-Y)分辨率采集四個熒光信號。
激光掃描共焦顯微鏡的最大放大倍率是多少?
FLUOVIEW系列FV 3000顯微鏡可視具體應用與從1.25倍低倍物鏡到150倍高倍物鏡的各種倍率物鏡配合使用。1.25倍至4倍的低放大倍率物鏡適用于采集整個組織的結構。要采集構成組織的細胞的形貌,請使用10倍至40倍之間的中等放大倍率物鏡;要采集細胞內的微觀結構,通常使用60倍或更高倍的高放大倍率物鏡。通過減小掃描鏡的角度,光學變焦可以進一步將圖像的放大倍率提高到超過物鏡放大倍率水平的50倍。
一臺激光掃描共焦顯微鏡的價格是多少?
根據您的預算和應用,激光掃描顯微鏡可以內置到系統中。如果您想要觀測的目標物體有限,則可以將激光器數量、探測器和物鏡類型的限制在一個實惠的價格。隨著研究目標的逐漸變化和發展,還可以通過添加必要的單元來升級系統。
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